1. 準(zhǔn)備工作液：

1）工作液D：取1份PF00011-A（Foxp3 / 轉(zhuǎn)錄因子固定/破膜濃縮液 4X）和3份PF00011-B（Foxp3 / 轉(zhuǎn)錄因子固定/破膜稀釋液 1X）進(jìn)行混合，混勻后備用。

2）工作液F：取1份PF00011-C（流式細(xì)胞術(shù)破膜緩沖液 10X）和9份超純水混勻后，制備成流式細(xì)胞術(shù)破膜緩沖液（1X）備用。

2. 按照Proteintech的細(xì)胞表面流式細(xì)胞術(shù)的實驗步驟中說明進(jìn)行細(xì)胞表面染色。（如不需要進(jìn)行細(xì)胞表面染色，略過此步驟。）

3. （表面染色后，洗滌，棄上清）每1 x 10^6/cells的EP管中加入1 mL工作液D，緩慢吹打以確保細(xì)胞重懸。在室溫下避光孵育45分鐘。

4. 在室溫下以 400-600g 離心5分鐘，棄上清，向EP管中加入2 mL工作液F，緩慢吹打以確保細(xì)胞重懸，400-600g 離心5分鐘，棄上清。

5. 將細(xì)胞沉淀重懸于 100 uL 工作液F中，靜置10-15min。

6. 使用抗體推薦用量 如5 uL/Test（或使用工作液F對流式抗體進(jìn)行預(yù)稀釋），避光孵育抗體-細(xì)胞混合物30-45min，用于檢測細(xì)胞內(nèi)抗原。

7. 孵育完畢后，每管中加入2 mL工作液F。

8. 在室溫下以400-600g離心試管 5 分鐘，然后棄上清。

9. 每管中加入2 mL工作液F。

10. 在室溫下以400-600g離心試管 5 分鐘，然后棄上清。

11. 將細(xì)胞沉淀重懸于加入0.2 mL工作液F中。

12. 在流式細(xì)胞儀上采集樣品。